قابل ذکر است دیسک‌های آنتی بیوتیکی مورد استفاده عبارت‌اند از: آمیکاسین و کوتریموکسازول که بر روی نمونه‌های کلبسیلا پنومونیه موجود مورد بررسی قرار گرفت.
۳-۱-۱۳ MIC
MIC: به معنی کمترین غلظت از یک آنتی‌بیوتیک است که تحت شرایط استاندارد، از رشد قابل رویت ارگانیسم مورد آزمایش جلوگیری می‌کند، به بیان دیگر، این روش اندازه‌گیری کمی، در جهت انتخاب دوز آنتی‌بیوتیک استفاده می‌شود. این آزمایش به عنوان تست مرجع و استاندارد می‌باشد. این غلظت برای آنتی‌بیوتیک، معمولاً بر حسب میکروگرم بر میلی‌لیتر و برای اسانس و عصاره بر حسب میلی‌گرم بر میلی‌لیتر بیان می‌شود. استفاده از محیط کشت مایع به دو روش Macrobroth dilution و Microbroth dilution است که در اوّلی از لوله‌های آزمایش و حجم در حد میلی‌لیتر و در دومی از میکروپلیت‌ها و حجم در حد میکرولیتر استفاده می‌شود. معمولاً برای کارهای میکروبیولوژی از میکروپلیت‌ها استفاده می‌شود.

برای بدست آوردن MIC، در تمامی چاهک‌های پلیت به غیر از چاهک‌های ستون اول، ۱۰۰ میکرولیتر از محیط کشت مربوطه ریخته شد، سپس با توجه به دانسیته عصاره، حجم مورد نظر برای اولین چاهک‌ها انتخاب و سری رقت از این چاهک‌ها ساخته شد. سپس ۱۰۰ میکرولیتر سوسپانسیون باکتری به تمامی چاهک‌ها افزوده و درنهایت به داخل انکوباتور ۳۷ درجه سانتی‌گراد انتقال داده شد. بعد از ۲۴ ساعت نتیجه MIC خوانده شد. جهت کنترل کیفی، ۱۰ میکرولیتر از خانه‌های کنترل مثبت (حاوی محیط کشت و سوسپانسیون باکتری) برداشته، به نسبت ۱ به ۱۰۰۰ رقیق گردید. سپس ۱۰۰ میکرولیتر از آن روی محیط کشت جامد مربوطه برده شد که پس از ۲۴ ساعت انکوباسیون باید حدود ۵۰-۱۰۰ کلنی روی آن رشد نماید.
جدول ۳-۲- رقت‌های تهیه شده در روش MIC

۱۰

۹

۸

۷

۶

۵

۴

۳

۲

۱

شماره چاهک

۱۰۲۴/۱

۵۱۲/۱

۲۵۶/۱

۱۲۸/۱

۶۴/۱

۳۲/۱

۱۶/۱

۸/۱

۴/۱

۲/۱

رقت

۳-۱-۱۶-۱ روش میکرو دایلوشن براث MIC
تعیین حداقل غلظت مهارکنندگی (MIC) Minimum Inhibitory Concentration:
آزمایش MIC در پلیت ۹۶ خانـه اسـتریل و بـا روش بـراث میکرودایلوشن انجام شد.
ابتدا از محیط کشت مولرهنیتـون آگار (مرک آلمـان) µl 100 داخـل ۹۶ چاهـک میکروپلیـت ریخته شد. سپس به اولین چاهک هـر ردیـف µl 100 عصـاره اضافه گردید و به عنوان غلظت استوک در نظر گرفته شدو از خانه دوم به سوم و به همـین ترتیـب تـا خانـه نهـــم رقیـــق شـــدند. در ردیـــف دیگـــری هـــم mg/ml100 از آنتی‌بیوتیک‌های مناسب با حساسیت باکتری مورد آزمایش اضافه شد. یک ستون تنها حاوی باکتری و محیط کشت برای اطمینان از فعال بودن باکتری اضافه گردید. در واقع خانه کنترل اسانس، محیط کشت و میکروب نیز جداگانه منظور شد.
در آخـر به همه چاهک‌ها µl 10 سوسپانسـیون میکروبی رقیـق شـده معادل لوله نیم مـک فارلنـد اضـافه گردیـد.
بعـد از ۲۴ سـاعت انکوباسیون در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد کـف پلیــت زیـرنــور مشــاهده شــد.
وجـود کــدورت کــه نشــان دهنــده رشـد یــا عــدم رشـد بــاکتری بــود را در جــدول مخصوص یادداشت کردیم. طبـق تعریـف غلظـت آخـرین (رقیق‌ترین) چاهک که هیچ کدورتی در آن ایجاد نشده، بـود معادل MIC قرار داده شد.
فصل چهارم
نتایج و نمودارها
۴-۱ بررسی قطر هاله عدم رشد عصاره گیاه چای سبز بر روی باکتری‌های جدا شده از عفونت‌های ادراری به روش دیسک دیفیوژن
در بررسی انجام شده به روش دیسک دیفیوژن، در تمام موارد بررسی شده نسبت به کوتریموکسازول مقاومت مشاهده شده ولی بین عصاره چای سبز و آمیکاسین از لحظ آماری تفاوت معنی داری وجود نداشت و عصاره با غلظت µg/ml100 اثراتی مشابه با آمیکاسین داشت.
۴-۲ نتایج آماری و بررسی داده‌ها
قدرت اثر آمیکاسین در کلبسیلا نومونیا با چای سبز در روش دیسک دیفیوژن تفاوت معنی داری نداشت (p=0.9531)؛ اما قدرت اثر کوتریموکسازول کمتر از آمیکاسین وچای سبز بود (p<0.0001).

۴-۲-۱ میانگین:
نمودار ۴-۱- مقایسه میانگین هاله عدم رشد بین چای سبز با غلظت µg/ml100 با دوآنتی بیوتیک مورد مطالعه (آمیکاسین و کوتریموکسازول) بر روی کلبسیلا پنومونیه
۴-۲-۲ Standard deviations یا انحراف معیار:

موضوعات: بدون موضوع  لینک ثابت


فرم در حال بارگذاری ...