برای تعیین غلظت H2O2، ۰/۲ گرم از بافت برگی با ۳ میلی­لیتر تری­کلرواستیک­اسید (TCA) 1/0 درصد در یک هاون چینی و محیط یخ سائیده شد. سپس عصاره با دور ۳۵۰۰ دور در دقیقه (rpm) به مدت ۵ دقیقه سانتریفیوژ گردید. ۱ میلی­لیتر از مایع رویی به ۱ میلی­لیتر بافر فسفات (۷pH=) و ۲ میلی­لیتر یدید پتاسیم یک مولار اضافه و سپس جذب مخلوط در طول موج ۳۹۰ نانومتر قرائت و مقدار H2O2 با بهره گرفتن از ضریب خاموشی ۲۸/۰ میکرومتر در سانتی متر محاسبه و بر حسب میکرومول بر گرم وزن تر بیان گردید (Velikova et al., 2000).

(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))

۳-۴-۹- تعیین میزان آب نسبی برگ (RWC)
برای این آزمایش، از قسمت­ های انتهایی ساقه چندین برگ کاملاً توسعه­یافته جدا و سپس دیسک­هایی به قطر ۸ میلی­متر از قسمت میانی پهنک برگ تهیه شد (از هر واحد آزمایشی ۱۰ دیسک برگی)، سپس دیسک­ها به کمک ترازوی دیجیتالی (با دقت ۰۱/۰ گرم) توزین و به پتری­دیش حاوی آب مقطر به مدت ۳ ساعت در یخچال (۴ درجه سانتی گراد) منتقل گردید. پس از خارج کردن دیسک­ها از آب مقطر جهت حذف رطوبت اضافی سطح دیسک­ها، آنها را روی کاغذ صافی قرار داده و سپس وزن آماس آنها اندازه ­گیری شد. پس از تعیین وزن آماس، دیسک­های برگی به آون (۷۰ درجه سانتی گراد) منتقل و پس از گذشت ۴۸ ساعت وزن خشک آنها تعیین و در نهایت RWC با بهره گرفتن از رابطه ذیل محاسبه شد ((Turner,1981.
میزان آب نسبی برگ = [[(وزن خشک – وزن آماس) / وزن خشک –وزن تر) ×۱۰۰
۳-۴-۱۰- تعیین فنول کل گل
برای تعیین فنول کل، ۱ گرم از گل­های کاملا باز شده توزین و با ۶ میلی­لیتر اتانول خالص مخلوط و هموژنیزه گردیدند. محلول به دست آمده با دستگاه سانتریفیوژ و با دور g×۱۲۰۰۰ به مدت ۱۲ دقیقه سانتریفیوژگردید. سپس ۵۰ میکرولیتر از محلول شناور جدا نموده و با ۵۵۵ میکرولیتر آب مقطر و ۱۰۰ میکرولیتر (V:V / 1:1) معرف فولین­سیکالتو رقیق شد. بعد از سپری شدن ۵ دقیقه در دمای اتاق، ۷۵۰ میکرولیتر از محلول سود نرمال، حاوی ۲۰ گرم در لیتر کربنات سدیم، به هر نمونه اضافه و سپس محلولها به مدت ۱ ساعت در دمای اتاق قرار گرفتند. در نهایت میزان جذب نمونه­ها در طول موج ۷۶۰ نانومتر قرائت گردیدند (Lemomoine et al., 2007).
* تمام ترکیبات (۴ میلی لیتر محلول کربنات سدیم + ۵ میلی لیتر فولین + ۵/۰ میلی­لیتر حلال عصاره) به غیر از عصاره، بلانک را تشکیل می دهد (به جای عصاره از ۵/۰ میلی لیتر حلال استفاده شد).
* منحنی استاندارد فنول با غلظت های ۲۵۰ و ۲۰۰ ،۱۵۰ ،۱۰۰ ،۵۰ ،۰ (میلی­گرم بر لیتر) از فنول تهیه گردید (شکل ۳-۶). از همبستگی بین غلظت های بکار برده شده فنول (میلی­گرم بر لیتر) با جذب­های خوانده شده توسط دستگاه اسپکتروفتومتر برای محاسبه فنول کل عصاره استفاده و بر حسب میلی­گرم بر گرم محاسبه گردید.
شکل ۳-۴: منحنی استاندارد فنول کل
۳-۴-۱۱- تعیین مقدار اسانس کل
برای اندازه ­گیری درصد اسانس از روش تقطیر با آب استفاده می­ شود. جهت استخراج اسانس از گل­های گیاه استفاده می­ شود. بنابراین پس از جمع­آوری و آماده ­سازی، گل­های گیاه داخل محفظه مخصوص گیاه در دستگاه کلونجر قرار داده شد. بدین وسیله اسانس همراه با بخار آب در قسمت سرد کننده جمع، اندازه ­گیری و برحسب درصد بیان می شود.
۳-۴-۱۳- سنجش ترکیبات اسانس
برای شناسایی ترکیبات، اسانس ­های مورد نظر پس از آماده ­سازی به دستگاه GC/MSتزریق شدند تا نوع ترکیبهای تشکیل­دهنده آنها مشخص شود. دستگاه گاز کروماتوگرافی استفاده شده از نوع Agilent 6890 با ستون به طول ۳۰ متر، قطر داخلی ۲۵/۰ میلیمتر و ضخامت لایه ۲۵/۰میکرومتر از نوع HP-5MS بودet al., 2005) (Young-Cheol.
۳-۵- تجزیه و تحلیل آماری داده ­ها
برای انجام تجزیه واریانس و مقایسه میانگین­های صفات اندازه ­گیری شده از نرم افزار SAS نسخه ۱/۹ استفاده شد. مقایسه میانگین­ها با بهره گرفتن از آزمون چند دامنه­ای دانکن در سطوح احتمال ۱ و ۵ درصد انجام گرفت. همچنین برای رسم نمودار از نرم افزار Excel استفاده گردید.
فصل چهارم
نتایج و بحث
۴- بررسی تاثیر غلظت ازت و نسبت نیترات به آمونیوم بر پارامترهای مورفولوژیکی گیاه همیشه بهار
۴-۱- تعداد گل در بوته
با توجه به جدول تجزیه واریانس (جدول۴-۱) مشاهده می­ شود که غلظت ازت بر تعداد گل در بوته در سطح احتمال ۱% معنی­دار شد. همچنین نتایج تجزیه واریانس بیانگر تاثیر معنی­دار برهمکنش غلظت ازت و نسبت نیترات به آمونیوم در سطح احتمال ۱% بر این صفت بود (جدول۴-۱).
جدول۴-۱: نتایج تجزیه واریانس تأثیر غلظت ازت، نسبت نیترات به آمونیوم و اثرات متقابل بر تعداد گل همیشه بهار

منابع تغییرات
درجه آزادی
تعداد گل
غلظت ازت

۱

**۲۸/۱۱۶

نسبت آمونیوم به نیترات

۳

**۵۳/۴۴

غلظت * نسبت

۳

**۶۱/۴۲

خطا

۲۴

۱۵/۰

ضریب تغییرات

–

موضوعات: بدون موضوع  لینک ثابت


فرم در حال بارگذاری ...